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吖啶酯的應用

吖啶酯類化合物在生命科學領域中的應用日趨廣泛,主要原因是它的發光效率高;反應條件溫和,隻需要H2O2和稀堿性,無需加入催化劑即可激發化學發光(CL).該類化合物CL反應機理的突出特點是參與反應的發光基團與修飾基團解離,發光效率不受連接臂長短的限製,光碎滅效應較小.通過對其結構的改造,大大增加了吖啶酯類化合物參與建立超微量免疫化學分析的可能性[1].由於生物體係成份極為複雜,置身於其中的CL化合物的反應動力學不同於實驗條件下的反應動力學,故數據分析係統參數處理的優化十分必要.再者,示蹤化合物和原始抗原結構上的微小差異,造成了針對其特異的抗體親和常數不同.以高靈敏度和高精密度為基礎的超微量免疫化學分析必需進行抗體工作濃度的最佳化構建.作者在合成和評價了吖啶-9-梭酸(4-氨乙基)-苯酯(AEPAC)和TO一3一AEPMAC的基礎上,就TO一3一AEPMAC測量參數和辜酮抗體工作濃度的優化進行分析.

關於吖啶酯的應用

1 吖啶酯發光法測定組織型纖溶酶原激活劑活性的研究

血栓疾病為危害人們生命安全的主要疾病之一,在幾種研究較多的纖溶藥物中,組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)由於其纖溶作用的特異性而倍受醫學界的青睞 。機體的許多組織中含有t-PA,但因量少,無法大量提取 。國外已有基因工程

產品用於臨床,國內正在加緊研製t-PA基因工程產品,急需建立靈敏 、簡便 、成本低廉的檢測方法 。目前國內成功地合成了吖啶酯,並對吖啶酯的性質做出全麵分析,為建立靈敏度高 、成本低廉的t-PA活性定量法提供了有利條件 。本方法用於測定人黑色素瘤細胞t-PA(mt-PA) 、中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)表達的rt-PA,獲得與纖維蛋白瓊脂板測定法(FAPA)相一致的結果;測定健康人靜脈血流阻斷前 、後血漿中t-PA活性的變化,顯出明顯差別 。用該法測定肺癌患者血漿t-PA活性,結果明顯高於正常人 。因此,該法可望用於對某些疾病的臨床診斷與基礎理論研究 。

2 黃嘌呤氧化酶一乙醛一吖啶化學發光分析新體係[2]

在黃嗦吟氧化酶的催化作用下,乙醛被空氣中的氧氧化為乙酸,同時產生過氧化氫;酶反應產生的過氧化氫在堿性介質中,氧化新吖啶酯發光劑10一甲基一9一(對甲酞苯基)吖啶酯氟磺酸鹽,產生化學發光,反應式如下:

化學發光反應機理為[s],在堿性介質中,過氧化氫陰離子(HOO一)進攻吖啶環的9一位碳原子形成吖啶酯的過氧化物(I),該過氧化物進行分子內成環反應生成具有1.2一二氧四環酮的吖啶化合物(,),化合物(,)分解形成激發態的9一甲基吖啶酮(IV),回到基態時則產生強的發光現象.酶聯化學發光反應產生的發光強度與乙醛濃度成正比,由此定量測定乙醛.

3 吖啶酯標記抗體應用於結核病人抗體水平的測定

吖啶1kg抗體偶聯物可應用於細菌 、病毒對人體產生的抗體以及人體自身免疫病所產生的抗體的測定 。目前已被公認的自身免疫病至少有30多種 。隻要製備該疾病的抗原,用以包被固相,利用吖啶酯人IgG抗體標記物即能進行測定,為臨床診斷和研究發病機理提供有意義的資料

70年代建立起來的化學發光免疫測定法(cLIA)(l〕是利用標記物的化學發光反應進行免疫複合物的測定 。此法特異性強 、靈敏度高,而且不使用同位素 。常用的發光劑有魯米諾 、魯米諾的衍生物(如氨基乙基丁基異魯米諾,簡稱ABEI)、光澤精 、草酸鹽等 。目前國內用得較多的是ABEI 。由於在測定體係中需加入催化劑,致使本底較高,因而影響其靈敏度 。

80年代Patel等o采用叮吮醋(AE)為發光劑,改進了標記方法,從而提高了測定的靈敏度 。本文製備了nT吒醋羊抗人IgG抗體偶聯物,建立了IgG固相發光免疫測定法(CLIA),並應用於結核病人抗體水平的測定 。